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本试剂盒采用化学修饰的热启动聚合酶，使用SYBR Green I嵌合荧光法进行miRNA的荧光扩增，具有高度的特异性，能够有效避免引物二聚体形成和其它形式的非特异扩增。反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，荧光信号强，反应灵敏度优于多家同类产品。试剂盒免费配置优化后的Tag Primer，使miRNA的扩增效果更有保障。本试剂盒可与miRNA反转录试剂盒(加尾法，货号：ME0019)配套使用。

• 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，可有效避免非特异扩增；
  
• 反应缓冲液经充分优化，PCR扩增效率高，拥有更高的反应灵敏度；
  
• 免费提供优化的Tag Primer，miRNA的扩增效果更有保障。

• 配制反应体系：
  取RNase-free离心管，配制如下混合液。
  

  成分	用量
  2×DIOG miRNA SYBR Mastermix	10μL
  DIOG Tag Primer（10μM）	0.4μL
  Specific primer（10μM）	0.4μL
  Temlate DNA/cDNA	2μL
  ddH2O	至20μL

  
  
• 设置反应程序：
  

  说明	温度	时间	循环数
  激活Taq	95℃	5min	1
  PCR循环	95℃	10s	40
  	60℃	30s
  熔解曲线	95℃	15s	1
  	60℃	1min
  	95℃	15s

  注：仪器类型不同，熔解曲线采集程序不同，使用仪器默认熔解曲线采集程序即可。

• 一般来说反应体系中引物终浓度为0.2μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时，可以在0.1～1.0μM范围内调整引物浓度。
  
• 加样体积一般不超过2.0μL，首次实验建议进行优化摸索，可分别取2.0μL RT原液及2、4、8、16、32、64倍稀释液进行qPCR。
  
• 如PCR结果不甚理想，可考虑采用3段法温度设置进行扩增，扩增条件为：95℃ 5min；95℃ 10S；60℃ 20S；70℃ 20S（收集荧光信号）。
  
• 试剂保存与操作过程中避免强光照射。
  
• 配制反应体系时，避免过于震荡，以防气泡产生。